Un champignon atopique, ça fait boum aussi ?

La mannitol-dèshydrogénase NADP-dépendante d’Alternaria alternata est un allergène fungique important. : P. B. Schneider, U. Denk, M. Breitenbach, K. Richter, P. Schmid-Grendelmeier, S. Nobbe, M. Himly, A. Mari, C. Ebner and B. Simon-Nobbe.

Division of Genetics, Department of Cell Biology, University of Salzburg, Salzburg, Austria, Department of Dermatology, University Hospital Zürich, Zürich, Switzerland, Division of Allergy and Immunology, Department of Molecular Biology, University of Salzburg, Salzburg, Austria, Center for Clinical and Experimental Allergology, IDI-IRCCS, Rome, Italy, Allergieambulatorium Reumannplatz, Vienna, Austria

dans Clinical & Experimental Allergy 36 (12), 1513-1524

– Contexte :

• Alternaria alternata est l’un des mycètes allergéniques les plus importants dans le monde.
• Il a été préalablement établi que la mannitol déshydrogénase (MtDH) est un allergène majeur de Cladosporium herbarum et des réactivités croisées ont été démontrées pour plusieurs allergènes fongiques.

– Objectif :

• L’objectif de la présente étude était de cloner la MtDH d’une bibliothèque cDNA d’A.alternata, d’exprimer et d’épurer la protéine de recombinaison de non fusion et d’examiner ses propriétés de liaison avec les IgE.

– Méthodes :

• Une bibliothèque de cDNA, préparée à partir des hyphes et des spores d’A.alternata, a été examinée pour la mannitol déshydrogénase par hybridation d’ADN avec l’homologue radioactivement marqué de C. herbarum comme témoin.
• Le clone résultant a été ordonné et exprimé de façon hétérogène par Escherichia coli en tant que protéine recombinante de non fusion, et a été épuré jusqu’à l’homogénéité et analysé dans sa capacité de liaison aux IgE.

– Résultats :

• la séquence codante pour le clone intégral de cDNA comporte 798 bp codant pour une protéine de masse moléculaire de 28.6 kDa et d’un pI (point isoélectrique) de 5.88.
• L’analyse de la séquence de la protéine a montré une identité de 75% et une homologie de 86% entre MtDHs d’A.alternata et de C.herbarum.
• La mannitol déshydrogénase fonctionnelle a été exprimée en contrainte BL21 (DE3) d’E. coli transformée avec le vecteur pMW172 et épurée jusqu’à l’homogénéité.
• L’enzyme catalyse la conversion, NADPH-dépendante, du d-fructose en d-mannitol.
• En IgE-ELISA et immunoblot, MtDH est identifié par 41% des patients allergiques à A.alternata.
• L’immunoreactivité in vivo du recombinant MtDH a été vérifiée par prick-test cutané.
• En conclusion, les expériences d’inhibition-ELISA ont confirmé la réactivité croisée entre le MtDHs d’A.alternata et de C.herbarum.

– Conclusion :

• La mannitol déshydrogénase (alt a 8) représente un nouvel allergène important de l’ascomycète A.alternata qui pourrait servir à améliorer des procédures diagnostiques et thérapeutiques.