Caractérisation d’un recombinant Mal d 4 et ses applications pour le diagnostic moléculaire de l’allergie à la pomme. : Y. Ma*, L. Zuidmeer+, B. Bohle*, S.T.H. Bolhaar, G. Gadermaier§, E. Gonzalez-Mancebo¶, M. Fernandez-Rivas¶, A.C. Knulst, M. Himly§, R. Asero||, C. Ebner**, R. van Ree+, F. Ferreira§, H. Breiteneder* and K. Hoffmann-Sommergruber*
*Department of Pathophysiology, Center of Physiology and Pathophysiology, Medical University Vienna, Vienna, Austria, +Academic Medical Center, Department of Experimental Immunology, Amsterdam, The Netherlands, Department of Dermatology/Allergology, University Medical Center, Utrecht, The Netherlands, §Department of Molecular Biology, University of Salzburg, Salzburg, Austria, ¶Fundácion Hospital Alcorcon, Madrid, Spain, ||Ambulatorio di Allergologia, Clinica San Carlo, Paderno Dugnano (MI), Italy and **Allergy Clinic Reumannplatz, Vienna, Austria
dans Clinical & Experimental Allergy 36 (8), 1087-1096.
– Contexte :
- Les Profilines sont des panallergènes omniprésents qui ont été bien caractérisés ; cependant, leur pertinence clinique est encore obscure.
– Objectif :
- Le but de la présente étude était de produire un recombinant de profiline de pomme ( rMal d 4) et d’évaluer son activité allergénique et son potentiel pour le diagnostic d’allergie moléculaire.
– Méthodes :
- Une molécule de Mal d 4 dérivée d’ADN complémentaire a été clonée, exprimée par Escherichia coli puis épurée par poly sépharose (L-proline).
- Un total de 28 sérums des patients allergiques aux pommes a été employé dans des tests d’IgE-ELISA, d’immunoblot, de RAST et d’histamine release.
- En outre, des tests cutanés (SPT) ont été réalisés chez cinq patients.
Résultats :
- Quatre fragments d’ADN codant pour la profiline de pomme Mal d 4, chacun avec une séquence ouverte de 393 nucléotides, ont été identifiés.
- Un isoforme Mal d 4.0101 a été exprimé par Escherichia coli puis purifié.
- La spectroscopie de masse a objectivé la masse prévue de 13.826 pour rMal d 4.0101, et les données d’analyse de dichroïsme circulaire étaient typiques d’une protéine pliée et l’examen par les rayons X a identifié la protéine comme monomère.
- Tous les échantillons de sérum comportaient des IgE se liant à rMal d 4.0101 en ELISA, immunoblot et RAST.
- En immunoblot, la liaison IgE - nMal d 4 (Mal d 4 naturel) était partiellement/complètement inhibée par la pré incubation avec rMal d 4.0101, et les valeurs de RAST à l’extrait de pomme ont été sensiblement réduites par le prétraitement du sérum avec rMal d 4.0101.
- Les tests cutanés et les tests d’histamine release employant rMal d 4.0101 purifié ont été positifs.
- rMal d 4.0101 purifié a été détruit en quelques secondes une fois soumis à la digestion par pepsine.
– Conclusions :
- La profiline de pomme a été identifiée par ADN complémentaire.
- Les propriétés physico-chimiques et allergéniques de rMal d 4.0101 purifié ont été évaluées, montrant que la protéine recombinante était identique à la protéine naturelle selon les analyses d’inhibition.
- Ainsi, Mal d 4 représente un autre exemple d’allergène approprié pour le diagnostic moléculaire en allergie alimentaire.
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