L’allergène majeur de la pomme Mal d 1 rendu muet par interférence ARN : Luud J.W.J. Gilissen, PhD a b *
Suzanne T.H.P. Bolhaar, MD, PhD c
Catarina I. Matos, MSc b
Gerard J.A. Rouwendal, MSc b
Marjan J. Boone, BSc b
Frans A. Krens, PhD b
Laurian Zuidmeer, PhD d
Astrid van Leeuwen, BSc d
Jaap Akkerdaas, MSc d
Karin Hoffmann-Sommergruber, PhD e
André C. Knulst, MD, PhD c
Dirk Bosch, PhD b
W. Eric van de Weg, PhD a b
Ronald van Ree, PhD d
# aFrom the Allergy Consortium Wageningen, Wageningen University and Research Center, Wageningen, The Netherlands
# bPlant Research International, Wageningen University and Research Center, Wageningen, The Netherlands
# cDepartment of Dermatology, University Hospital Utrecht, Utrecht, The Netherlands
# dDepartment of Immunopathology, Sanquin Research, Amsterdam, The Netherlands
# eDepartment of Pathophysiology, Medical University, Vienna, Austria
dans JACI February 2005 • Volume 115 • Number 2
– Contexte :
- L’allergie à la pomme est dominée par des anticorps IgE dirigés contre Mal d 1 dans des régions où le pollen de bouleau est endémique.
- Disposer de pommes dont le niveau en Mal d 1 serait significativement diminué permettrait à la plupart des patients de ces régions de manger des pommes sans présenter de réaction allergique.
– Objectif :
- Le but de cette étude été d’inhiber expression de Mal d 1 dans des plants de pommiers par interférence ARN.
– Méthode :
- Des plants de pommiers cultivés in vitro ont été transformés avec un intron contenant une séquence spécifique de Mal d 1 répétée et inversée.
- La vérification de la présence de la modification a été faite par PCR.
- l’expression de Mal d 1 a été suivie par des tests cutanés « prick to prick » chez 3 patients allergiques pommes ainsi que par immunoblotting avec un anticorps monoclonal réactif au Mal d 1 et des anticorps IgE contre Mal d 1.
– Résultats :
- Après transformation, les plants ont été sélectionnés sur la base d’un phénotype normal et d’un certain taux de croissance.
- En PCR, on a démontré la présence du dispositif rendant le gène silencieux chez 6 des 9 plants.
- Au moyen de tests cutanés, on a montré que les plants sauvages avaient une allergénicité significativement plus forte (P<0.05) que 5 des transformants.
- La réduction de l’expression de Mal d 1 a été confirmée par immunoblotting.
- Pour les plants sauvages et les échecs de transformants, une forte bande a été détectée réagissant avec un anticorps monoclonal (5H8) dirigé contre Mal d 1 au poids apparent attendu de 17 kDa.
- Cette bande était virtuellement absente chez les transformants.
- Avec les anticorps IgE humains, la même observation a été faite.
– Conclusions :
- L’expression de Mal d 1 a été réduite avec succès par interférence ARN.
- Ceci a eu pour conséquence une baisse significative de l’allergénicité in vivo.
- Ces observations sont en faveur de la faisabilité de la production de pommes hypoallergéniques en Mal d 1 par un « gene-silencer ».
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