Activité effectrice des allergènes de l’arachide : un rôle essentiel pour Ara h 2, Ara h 6, et leurs variants. : H. S. Porterfield * , K. S. Murray † , D. G. Schlichting * , X. Chen * , K. C. Hansen †,‡ , M. W. Duncan †,‡ and S. C. Dreskin *
* Department of Medicine, University of Colorado at Denver, Aurora, CO, USA, † Department of Pediatrics, University of Colorado at Denver, Aurora, CO, USA and ‡ Proteomics Core School of Medicine, University of Colorado at Denver, Aurora, CO, USA
dans Clinical & Experimental Allergy
Volume 39 Issue 7, Pages 1099 - 1108
– Contexte :
- Une propriété importante des allergènes est leur capacité à se lier aux IgE et à activer les mastocytes et les basophiles.
- Les effets de l’activité des allergènes d’arachide n’ont pas été bien caractérisés.
– Méthodes :
- Des extraits bruts de farine d’arachide fraiche ont été fractionnés par filtration sur gel.
- La fonction effectrice a été testée par la mesure de la dégranulation de cellules RBL SX-38 sensibilisées par des IgE de sera individuels et des pools de sérums de patients allergiques à l’arachide.
– Résultats :
- Après filtration sur gel, 75 ± 7% des protéines et 76 ± 16% (n = 3) de l’activité (testés avec un pool de 11 sera) ont été récupérés dans les fractions restantes.
- La majorité (85 ± 2%, n = 3) de l’activité récupérée réside dans une fraction avec une moyenne théorique de poids moléculaire d’environ 20 kDa et un intervalle de 13 à 25 kDa.
- Lorsque toutes les fractions individuelles ont été recombinées, l’activité mesurée a été semblable à celle de l’extrait original [140 ± 43% pour les tests avec le pool de sérum (n = 2) et 66 ± 7% pour les tests avec des sera individuels (n = 4 )] ; lorsque toutes les fractions individuelles à l’exception de la fraction de 20 kDa ont été recombinées, la mesure de l’activité n’était plus que de 8 ± 2% (n = 2) de l’extrait original pour les tests avec les pools de sera et de 10 ± 4% (n = 3) pour les tests avec les sérums individuels.
- Une électrophorèse sur gel en deux dimensions de cette fraction biologiquement active a révélé plus de 60 spots de protéines.
- L’analyse des 50 spots les plus importants par technique MALDI (matrix-assisted laser-desorption ionization) et spectrométrie de masse avec analyseur à temps de vol et de la totalité du mélange par spectrométrie de masse automatique en tandem couplé à une chromatographie capillaire liquide a révélé que plus de 97% de la masse protéique se composait d’Ara h 2.0101, 2.0201, d’ isoformes d’Ara h 6, et des variants de ces protéines.
– Conclusion :
- Ara h 2 et Ara h 6 représentent la majorité de l’activité effectrice d’un extrait brut d’arachide.
