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Croquez la pomme et vous aurez des pépins avec la profiline !
jeudi 14 septembre 2006, par
La bibliothèque des recombinants mis à disposition des allergologues mérite de s’étoffer : les travaux se multiplient dans ce domaine, témoin cette étude concernant un recombinant de la profiline de la pomme. Le chemin vers un diagnostic moléculaire maîtrisé n’est cependant pas encore suffisamment bien tracé...
Caractérisation d’un recombinant Mal d 4 et ses applications pour le diagnostic moléculaire de l’allergie à la pomme. : Y. Ma*, L. Zuidmeer+, B. Bohle*, S.T.H. Bolhaar, G. Gadermaier§, E. Gonzalez-Mancebo¶, M. Fernandez-Rivas¶, A.C. Knulst, M. Himly§, R. Asero||, C. Ebner**, R. van Ree+, F. Ferreira§, H. Breiteneder* and K. Hoffmann-Sommergruber*
*Department of Pathophysiology, Center of Physiology and Pathophysiology, Medical University Vienna, Vienna, Austria, +Academic Medical Center, Department of Experimental Immunology, Amsterdam, The Netherlands, Department of Dermatology/Allergology, University Medical Center, Utrecht, The Netherlands, §Department of Molecular Biology, University of Salzburg, Salzburg, Austria, ¶Fundácion Hospital Alcorcon, Madrid, Spain, ||Ambulatorio di Allergologia, Clinica San Carlo, Paderno Dugnano (MI), Italy and **Allergy Clinic Reumannplatz, Vienna, Austria
dans Clinical & Experimental Allergy 36 (8), 1087-1096.
– Contexte :
- Les Profilines sont des panallergènes omniprésents qui ont été bien caractérisés ; cependant, leur pertinence clinique est encore obscure.
– Objectif :
- Le but de la présente étude était de produire un recombinant de profiline de pomme ( rMal d 4) et d’évaluer son activité allergénique et son potentiel pour le diagnostic d’allergie moléculaire.
– Méthodes :
- Une molécule de Mal d 4 dérivée d’ADN complémentaire a été clonée, exprimée par Escherichia coli puis épurée par poly sépharose (L-proline).
- Un total de 28 sérums des patients allergiques aux pommes a été employé dans des tests d’IgE-ELISA, d’immunoblot, de RAST et d’histamine release.
- En outre, des tests cutanés (SPT) ont été réalisés chez cinq patients.
Résultats :
- Quatre fragments d’ADN codant pour la profiline de pomme Mal d 4, chacun avec une séquence ouverte de 393 nucléotides, ont été identifiés.
- Un isoforme Mal d 4.0101 a été exprimé par Escherichia coli puis purifié.
- La spectroscopie de masse a objectivé la masse prévue de 13.826 pour rMal d 4.0101, et les données d’analyse de dichroïsme circulaire étaient typiques d’une protéine pliée et l’examen par les rayons X a identifié la protéine comme monomère.
- Tous les échantillons de sérum comportaient des IgE se liant à rMal d 4.0101 en ELISA, immunoblot et RAST.
- En immunoblot, la liaison IgE - nMal d 4 (Mal d 4 naturel) était partiellement/complètement inhibée par la pré incubation avec rMal d 4.0101, et les valeurs de RAST à l’extrait de pomme ont été sensiblement réduites par le prétraitement du sérum avec rMal d 4.0101.
- Les tests cutanés et les tests d’histamine release employant rMal d 4.0101 purifié ont été positifs.
- rMal d 4.0101 purifié a été détruit en quelques secondes une fois soumis à la digestion par pepsine.
– Conclusions :
- La profiline de pomme a été identifiée par ADN complémentaire.
- Les propriétés physico-chimiques et allergéniques de rMal d 4.0101 purifié ont été évaluées, montrant que la protéine recombinante était identique à la protéine naturelle selon les analyses d’inhibition.
- Ainsi, Mal d 4 représente un autre exemple d’allergène approprié pour le diagnostic moléculaire en allergie alimentaire.
Un recombinant Mal d 4 a été isolé, caractérisé et on a vérifié la conformité de la réactivité du recombinant par rapport à l’allergène naturel.
Les réactions allergiques aux profilines en Europe du Nord sont liées pour l’essentiel aux réactions alimentaires s’inscrivant dans un syndrome pollen - fruits, légumes.
Un test positif à la pomme native recouvre 3 situations différentes :
– Réactivité cutanée à la profiline
– à PR-10 (homologues de Bet v 1)
– à PR-14 = LTP (protéine de transport de lipides)
La profiline Mal d 4 est une petite molécule de 14 kDa, stable à la chaleur et non stable à la pepsine, comme toutes les autres profilines.
Pour les sujets allergiques, les profilines sont responsables de troubles cliniques légers dont le type est le syndrome oral, occasionné par l’ingestion d’aliments frais et crus.
Les symptômes systémiques sont rares.
Les jus commerciaux sont généralement tolérés.
Les tests cutanés aux aéroallergènes sont généralement positifs pour les pollens, sauf parfois pariétaire et cyprès.
Les tests cutanés aux extraits alimentaires commerciaux sont généralement négatifs ou faiblement positifs.
Les profilines des plantes sont très similaires (toutes les profilines des plantes croisent entre elles) mais elles diffèrent notablement des profilines des champignons (30 % d’identité de séquence) et elles diffèrent à peu près autant des profilines humaines (30 % d’identité de séquence également).
Marqueurs : tomate, citron, melon, pastèque, ananas, banane, kaki.
Le cluster cucurbitacées/banane/agrumes a pour base une réactivité vis à vis des profilines.
Dans les recombinants dont nous disposons en pratique, nous avons déjà 2 profilines : Bet v 2 et Phl p 12.
L’utilité d’un troisième recombinant paraît plus théorique que pratique en raison du fort degré de réactivité croisée de toutes les profilines végétales.
A quand un recombinant LTP, qui nous fait cruellement défaut !...
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